Sodobne metode specifične diagnoze alergijskih bolezni

V zadnjih 20-30 letih je rast alergijskih bolezni postajala vse bolj očitna in po ocenah SZO bodo v 21. stoletju zasedli vodilne položaje v razširjenosti med vsemi boleznimi. Med glavnimi razlogi za to povečanje pojavnosti je neugodno ekološko stanje, sprememba kakovosti prehrane, visoke obremenitve s stresom, nenadzorovana uporaba antibiotikov in poslabšanje genetskega bazena.

Alergijske bolezni so v svojih manifestacijah zelo raznolike, pogosto se skrivajo pod krinko drugih bolezni, kot so prehlade ali koža, zato pravočasna in natančna diagnoza igra ključno vlogo pri tem, kako učinkovito bo zdravljenje in kako se bo bolnikova kakovost življenja na koncu spremenila.

Diagnoza alergijskih bolezni se izvaja v več fazah:

• zbiranje alergološke anamneze;
• splošne klinične in laboratorijske preiskave;
• posebno klinično alergijsko diagnozo (izvajanje alergijskih kožnih testov in / ali provokacijskih testov z alergeni);
• alergološko in imunološko preiskavo (določitev ravni skupnega in specifičnega IgE).

Zbirka alergološke anamneze in pregled bolnika omogočata identifikacijo dejstev in znakov, ki kažejo na alergijsko naravo bolezni, kar je treba potrditi s posebnimi metodami pregleda.

Namestitev kožnih testov je značilna za vnos alergena skozi kožo in oceno velikosti in narave edema ali vnetne reakcije, ki se je razvila (prick test, intradermalni test, test uporabe in test skalifikacije).

V primeru neskladnosti med podatki o anamnezi in rezultati testiranja na koži se uporabljajo provokativni testi (inhalacija, nosna, konjunktivna in prehranska).

Zaradi povečanega tveganja za sistemske reakcije vse kožne in provokativne teste opravi le alergolog-imunolog, ki je usposobljen za izvajanje tega postopka v specializirani alergološki bolnišnici ali pisarni. Kljub široki uporabi te metode diagnoze ima številne kontraindikacije, med katerimi: odločilnega pomena je starost bolnika in njegovo individualno zdravstveno stanje (prisotnost somatske patologije v fazi dekompenzacije, potreba po stalnem vnosu antihistaminikov in hormonskih pripravkov, itd.).

V zvezi s tem je in vitro alergijska diagnoza, za katero je značilna absolutna varnost za bolnika in preprostost izvajanja študije ter ima tudi številne prednosti, dobila širšo uporabo:

• brez kontraindikacij za pregled;
• ne povzročajo dodatne preobčutljivosti, ni tveganja za anafilaktične reakcije;
• brez starostnih omejitev je možno opraviti že v zelo zgodnji starosti;
• poljubno število testiranih alergenov, odkrivanje polivalentne preobčutljivosti;
• uporaba seruma za raziskave v katerem koli laboratoriju (testi na daljavo).

Namen te vrste diagnostike alergijskih bolezni je določiti raven IgE (skupni IgE in specifični IgE) v človeškem serumu, kar kaže na prisotnost atopije pri bolniku in možen razvoj alergijske reakcije. Vendar je treba jasno razumeti pomen vsakega od podrazredov protiteles razreda E.

Povečanje ravni skupnega IgE se lahko pojavi pri številnih drugih boleznih, ki nimajo alergijske narave, na primer pri parazitskih invazijah. V takih primerih ima določitev specifičnega IgE pomembno vlogo, kar omogoča identifikacijo vzročno pomembnega alergena ali njegovo odsotnost in na koncu postavi pravilno diagnozo in predpiše ustrezno zdravljenje. Zato je pomembno upoštevati naslednje glavne indikacije za določanje celotnega IgE in specifičnega IgE.

Določanje skupnega IgE:

• primarna diagnoza atopije;
• diagnosticiranje infekcij helmintov;
• diagnozo stanja imunske pomanjkljivosti;
• diagnozo hiper-IgE sindroma in IgE-mieloma;
• diferencialna diagnoza alergijskih bolezni med različnimi boleznimi, podobnimi v klinični simptomatologiji (kronični rinitis in dermatitis, pogoste bolezni dihalnih poti itd.).

Komplet reagenta "ELISA-skupni IgE" podjetja "Alkor Bio" vam omogoča, da določite vsebnost celotnega imunoglobulina E v človeškem serumu z metodo encimsko vezanega imunskega testa. Set ima vse potrebne lastnosti za pridobitev zanesljivega in zanesljivega rezultata, ki bo pomagal pri izbiri nadaljnjih taktik upravljanja pacientov.

Določanje specifičnih IgE:

• potrebo po razjasnitvi vzročno pomembnega alergena v vseh primerih, zlasti z vprašljivimi rezultati testiranja na koži;
• diferencialna diagnostika alergijskih in nealergijskih (psevdoalergijskih) bolezni;
• težavnost ali nezmožnost izvajanja preskusov in vivo;
• odkrivanje latentne (subklinične) preobčutljivosti - odkrivanje visokih ravni specifičnih protiteles IgE v odsotnosti kliničnih manifestacij kaže na povečano tveganje za alergijske reakcije na te alergene;
• spremljanje koncentracije IgE med specifično imunoterapijo.

Metode, ki se uporabljajo pri alergijski diagnostiki in vitro, temeljijo na dosežkih imunskega testa. Trenutno obstajajo 2 osnovna testna sistema za določanje specifičnega IgE z ELISA.

Prva metoda je alergijski test (alergen se sorbira na »trdno fazo« - mikroplošče, papirna disketa, nitrocelulozna membrana. Ta metoda se veže na alergen tako IgE kot imunoglobuline drugih razredov, npr. IgG (glej sliko 1). Od tega je odločilnega pomena sorpcijska zmogljivost trdne faze, od katere bo odvisna natančnost rezultata, pri čemer so za testne sisteme te zasnove značilna nepopolna ocena ravni specifične vsebnosti IgE. th e plošče alergeni (velikost mesto) in nezmožnost, da v celoti avtomatizirati analizo testnih sistemov na diskih.

Slika 1 Shema testa alergije.

Druga metoda je test reverzibilnega alergijskega sorbenta (možnost »zajetja« encimskega imunskega testa). Protitelesa na IgE so imobilizirana na trdni fazi, alergen pa je v tekoči biotinirani obliki, zaradi česar se izločijo navzkrižne reakcije z drugimi razredi imunoglobulinov in popolna vezava protiteles na IgE in alergene s specifičnim IgE v serumu bolnika (slika 2).

Slika 2 Shema preizkusa povratnega alergijskega sorbenta (varianta "zajetja" ELISA).

Poleg tega se ta tehnika tekoče faze zlahka prilagodi avtomatiziranim sistemom za izdelavo imunoloških analiz, ne zahteva, kot v primeru raziskav na trdnih diskih, posebnih paddlerjih za postopek pranja, in omogoča tudi merjenje optične gostote vzorca na spektrofotometru pri valovni dolžini 450 nm. in 405 nm, kar poveča natančnost analize in razširi obseg zaznavnih koncentracij specifičnega IgE.

Ta metoda se v celoti izvaja v kompletu reagentov "Allergo IFA specifičnega IgE", ki je zasnovan za kvantitativno določanje alergensko specifičnih imunoglobulinov E v človeškem krvnem serumu z metodo encimsko vezanega imunskega testa domačega proizvajalca reagentov za ELISA Alkor Bio.

Alergeni, ki jih proizvaja Alkor Bio, so predstavljeni v skupinah, med katerimi se lahko razlikujejo alergeni v hrani, alergeni na cvetni prah, alergeni v gospodinjstvu, epidermalni alergeni in živalske beljakovine, travniki in pleveli ter mešanice alergenov.

Določitev specifičnih IgE na te alergene, kot najpogosteje povzroča alergijske bolezni, bo močno olajšala delo alergologa-imunologa in pomagala pri imenovanju specifične imunoterapije.

Imajo visoko specifičnost in občutljivost, kot tudi kvantitativno oceno rezultatov, vam omogoča, da določite bolnikovo preobčutljivost za določen alergen. Testni sistem ima potrdilo o registraciji Ruske federacije, ki dovoljuje uporabo v Rusiji.

Tako je razvoj tehnologij ELISA bistveno razširil diagnozo alergijskih bolezni, kar je prineslo neprecenljivo pomoč pri prepoznavanju alergij pri bolnikih in kasnejšem imenovanju specifične imunoterapije.

Safin V.R., LLC "Alkor Bio", Sankt Peterburg.

http://medimm.ru/2015-08-19-11-47-01/117-sovremennaya-allergodiagnostika

Preskusi alergije

Testi alergije in diagnostike alergije

Diagnoza alergodije je laboratorijska tehnika za ugotavljanje vzroka preobčutljivosti telesa. Alergijski testi se izvajajo z imunološko metodo in s pomočjo kožnih testov. Za dokončno diagnozo upoštevamo rezultate pregleda, klinično sliko bolezni, alergijsko in dedno zgodovino.

Imunološka metoda

Da bi ugotovili vzrok za senzibilizacijo telesa, se serološka diagnostika pogosteje uporablja z ELISA (encimsko vezan imunski test). Za študijo naredite vzorčenje venske krvi na prazen želodec zjutraj. V periferni krvi so zaznana specifična protitelesa - imunoglobulini razreda E (Ig E) in G (Ig G). Imunski sistem sintetizira specifična protitelesa, ko alergen vstopi v telo skozi dihalne poti, prebavni trakt, sluznico in kožo.

Ig E nastane med alergijsko reakcijo z takojšnjim tipom odziva - klinični znaki se pojavijo v 5-120 minutah po stiku z alergenom. Ig G se sintetizira v alergijski reakciji z zakasnjenim tipom, ko se značilni simptomi bolezni pojavijo 24 do 72 ur po stiku z alergenom. Imunološka metoda je manj občutljiva kot kožni testi. Prednost - lahko se daje otrokom, mlajšim od 5 let, pri jemanju antihistaminikov v akutni fazi bolezni.

Kožni testi

Kožni testi so predpisani po posvetovanju z alergologom in določitvijo niza potrebnih testnih sistemov. Če ugotovite preobčutljivost za en alergen, lahko domnevate, da se pojavijo alergije na druge alergene, ki imajo navzkrižno reakcijo, značilno za vrsto. Ta pristop zmanjšuje finančne stroške diagnoze in omogoča pripravo terapevtske diete.

Vrste kožnih testov.

• Preskus odrezavanja se opravi med začetno diagnozo preobčutljivosti telesa. Na koži hrbta ali podlakti nastanejo praske z iglo ali iglo, po tem pa se na mesto poškodbe kože namesti tekočina, ki vsebuje testni alergen. Rezultat analize se oceni v 15-20 minutah.
• Injekcijski test - zaznamuje globlji vnos laboratorijskega alergena v kožo. V predelu podlakti je nekaj kapljic tekočega alergena, ki iglo dodatno preluknjajo. Rezultat študije se oceni v 10-15 minutah.
• Intradermalni test se izvaja s kliničnimi znaki alergije, vendar z negativnim rezultatom skarifikacije in injekcijskih testov. Tekoči sterilni alergen dajemo s subkutano injekcijo. Rezultat se oceni v 5-7 minutah.

Kožni testi se ne izvajajo v aktivni fazi alergije, medtem ko jemljete antihistaminik in glukokortikoide. Pri otrocih, mlajših od 5 let, je diagnoza neinformativna.

http://patronage.ru/drugie_analizy/allergodiagnostika.html

Alergijska diagnoza

Diagnostika alergodije je kompleksen in dolgotrajen proces, saj ni lahko določiti, katera od snovi povzroča alergijske reakcije. Alergija - preobčutljivost telesa na določene snovi. Lahko se zgodi nepričakovano in se podeduje. Če sta oba starša alergična, obstaja možnost prenosa do 80% na otroka. Po statističnih podatkih vsaka peta oseba trpi za to boleznijo. Ta visoka stopnja je povezana s povečano alergijsko obremenitvijo telesa.

Za določitev alergena v našem zdravstvenem centru lahko opravite vse potrebne raziskave.

Obstaja več vrst alergij:

• Dihanje. Povzročitelji v tem primeru so lahko spore gliv, rastlinski cvetni prah, prah, živalska dlaka, delci pršic.
• Hrana. Lahko se pojavi pri uživanju hrane, kot tudi v procesu njihove priprave.
• Insect. Stik z žuželkami (čebelami, komarji, ose in drugimi) in njihovimi ugrizi lahko povzroči alergijsko reakcijo.
• Drog. Razvita na antibioticih, analgetikih, insulinu in mnogih drugih zdravilih.
• Nalezljiva. V tem primeru so alergeni mikrobi.
• Kožo. Je posledica izpostavljenosti kožnih alergenov.

Simptomi alergije

Pojav alergij je lahko sezonski in celoletni. Zadnji tip povzročajo alergeni, ki so nenehno v našem habitatu. Sezonsko prihaja z različnimi letnimi časi.

Med simptomi alergij so:

• otekanje;
• izcedek iz nosu;
• kihanje;
• solzenje;
• urtikarija;
• kožni izpuščaji;
• seneni nahod;
• rdečina oči.

V hujših primerih lahko pride do bronhospazma, konvulzij, angioedema, težkega dihanja, izgube zavesti, oseba lahko gre v anafilaktični šok, komo ali celo umre.

Pri otrocih se alergija kaže v obliki: ekcema, izpuščajev, nevrodermatitisa, trebušne napetosti, nenormalnega blata, regurgitacije, črevesne kolike, bruhanja, težav z dihanjem, kožnih lezij, zamašenega nosu.

Test alergije

Najprej se morate posvetovati z izkušenim alergologom, ki vam bo dal napotitev za analizo. Za otroke opravite temeljito diagnozo. Na začetku je zbiranje podatkov o prisotnosti alergijskih bolezni pri bližnjih. Specifična alergijska diagnoza je določena v plazmi imunoglobulina E (IgE). Če ima nosečnica visoko vsebnost IgE v popkovnični krvi, je tveganje za atopične bolezni zelo veliko. Zdravnik lahko tudi določi nekatere indikacije za študijo:

1. poslabšanje alergij ali kroničnih bolezni;
2. okužbe (npr. SARS, angina);
3. nosečnost;
4. hudo stanje bolnika;
5. hormonska terapija;

Po določenem alergenu lahko strokovnjaki identificirajo skupino tistih snovi, na katere bo bolnik imel tudi alergijsko reakcijo.

Raziskava poteka v več fazah. Najprej se izvede inhalacijski test, ki vsebuje alergene različnih skupin. Če je test pokazal pozitiven rezultat, se imenuje globlja študija. Obstaja več možnosti za njegovo izvajanje.

Krvni test Šteje se, da je višja v ceni, vendar manj občutljiva. Pozitivna stran te vrste testov za alergije je, da se lahko uporablja za določanje imunoglobulina E.

Kožni test Izpolnjeni, če obstaja sum, da določen alergen ali skupina povzroča alergijo. Poleg tega morate zdravnika opozoriti na sprejeta zdravila. Izvede se lahko na enega od treh načinov:

1. Scarification. Za ta preskus se z zarezo naredi lanceta, tako da raztopina pride v kožo. Če se pojavi srbenje ali pordelost, to pomeni, da obstaja alergija na to snov.
2. Test za injiciranje se izvede na naslednji način: nekaj kožnih alergenov položimo na kožo. Nato se vsaka kapljica prebode z iglo. V tem primeru rezultat ne bo dolgo čakal, če pa bo prišlo do alergije, se bo pojavil v 15 minutah.
3. Intradermalni test se uporablja samo, če injiciranje ni dalo rezultatov. V tem primeru se alergen injicira neposredno pod kožo pacienta. Ta metoda je lahko osnova za sistematično alergijsko reakcijo, zato ga zdravniki ne predpisujejo takoj, temveč le kadar je to potrebno.

Preiskave in alergije na zdravila se izvajajo samo pod strogim nadzorom zdravnikov v bolnišnici. Izvajanje provokativnega testa je sestavljen iz dajanja alergenov neposredno v organ, ki je dovzeten za alergije: konjunktival - razkriva alergijski konjunktivitis; nosna - uporablja se pri sumu na alergijski rinitis; inhalacija - uporablja se za diagnosticiranje bronhialne astme, alergije na hrano.

Zdravljenje alergij

Prva stvar, ki vam jo bo povedal zdravnik, je, da alergij ni mogoče popolnoma ozdraviti. Če jemljete zdravila in vodite pravi življenjski slog, lahko pozabite na to bolezen. Vsa zdravila so izbrana za vsakega bolnika posebej. To so predvsem vitamini, adsorbenti in desenzibilizatorji, v hujših primerih pa tudi hormoni.

http://medi-center.ru/laboratornaya-diagnostika/allergodiagnostika

Laboratorijske metode specifične alergijske diagnoze

Te metode se lahko široko uporabljajo pri alergijskih boleznih v akutni fazi, v obdobjih masivnega stika z alergenom, z visoko občutljivostjo bolnikov na alergen, če pri otrocih obstajajo kontraindikacije pri ugotavljanju poklicnih alergijskih bolezni, saj izključujejo možnost nespecifičnih, lažnih alergijskih reakcij.

Med različnimi metodami specifične alergijske diagnostike v tipu, odvisnem od reaginskega IgE, je določitev monoklonskih IgE bolj zaželena.

Obstajajo posredne metode za določanje IgE in najpogostejše neposredne metode za detekcijo specifičnih IgE, ki temeljijo na novih tehnologijah in uporabi diagnostike v obliki standardiziranih in certificiranih alergenov.

Reakcija pasivnega prenosa v skladu s Proustlitz - Küstner (posredna metoda izdelave kožnih testov) se pogosteje uporablja v pediatrični praksi pri ugotavljanju alergij na hrano. Bistvo metode je v reakciji pasivnega prenosa na prejemnika senzibilizacije z intradermalno aplikacijo 0,1 ml bolnikovega seruma s prisotnostjo v njem domnevno specifičnega IgE. Po 24 urah se v istem območju injicira 0,02 ml domnevnega alergena. Reakcija se zabeleži po 20 minutah. Vendar nevarnost prenosa aidsa, virusnega hepatitisa in drugih okužb ne omogoča široke uporabe te metode.

Specifična zaznava IgE

Študijo celokupnega IgE izvajamo s papirnim radio-imunosorbentnim testom (metoda PRIST), določanjem alergijsko specifičnega IgE - radioalergosorbentnega testa (metoda RAST). Za določanje alergijsko specifičnega IgE se vedno bolj uporablja metoda encimsko vezanega imunskega testa (ELISA).

Metoda RAST je najbolj specifična in natančna, saj temelji na uporabi radioaktivne oznake. Njegovo bistvo je povezava specifičnega IgE seruma, ki se preučuje, z alergenom, nameščenim na ploščo. Po pranju nespecifičnih (celotnih) IgE dodamo vsebini 125I-označena protitelesa proti IgE. Nastali radioaktivni kompleks se odčita na scintilacijskem števcu.

Metoda ELISA

Serum subjekta, ki vsebuje specifičen IgE, se nanese na polistirensko površino mikroplošče z adsorbiranim nizom alergenov, ki vežejo le določene specifične IgE.

S točkovnim imunskim testom se alergeni nanesejo v obliki pik na nitroceluloznih diskih.

Za določitev koncentracije specifičnega IgE, povezanega z alergenom, dodamo protitelesa (označena z encimi) na IgE. V naslednji fazi se vsebnost specifičnega IgE v vertikalnem snopu v sistemu Uniskan ali Multiscan določi z uporabo posebnih reagentov, ki reproducirajo barvno reakcijo, katere intenzivnost je odvisna od koncentracije specifičnega IgE v kombinaciji z alergenom. Običajno ne presega 210 ie / enoti.

Poleg odkrivanja specifičnih IgE se uporabljajo tudi drugi laboratorijski testi za diagnosticiranje obeh od protiteles odvisnih reakcij (določanje kazalnikov specifične poškodbe bazofilcev, alergijskih protiteles v pasivnih reakcijah hemaglutinacije, reakcij fiksacije komplementa itd.) In reakcij zakasnjenega (celičnega) tipa (reakcija zaviranja levkocitov). krvne preiskave - RTML, testiranje celic, ki tvorijo rozete - ROCK, test nevtrofilskih poškodb itd.

Njihova uporaba v alergijski praksi ni izgubila svojega pomena - prepoznavanje preobčutljivosti na alergene, avtoantigeni omogoča bolj ciljno zdravljenje in rehabilitacijo bolnikov.

Reakcija neposredne specifične poškodbe krvnih bazofilcev

Krvni bazofili, mastociti - ciljne celice pri izvajanju alergijskih reakcij takojšnjega tipa. IgE s pomočjo Fc fragmenta je fiksiran na receptorje membran teh celic in s pomočjo fragmenta Fb specifično reagirajo z alergenom. To spremlja ostra aktivacija (degranulacija) ciljnih celic, ki se uporablja kot marker alergijske reakcije.

Za formulacijo reakcije dodamo 5 ml preskusne krvi v epruveto za centrifugiranje s 5 kapljicami 6% vodne raztopine trilona B in inkubiramo eno uro pri 37 ° C. Nastala suspenzija levkocitov s Pasteurovo pipeto se prenese v čisto epruveto in nato vlije v dve centrifugalni epruveti po 0,3 ml. V prvo epruveto (eksperimentalno) dodamo 0,1 ml izotonične raztopine natrijevega klorida, v kateri se raztopi delovni odmerek alergena, in drugi ml (kontrolni) raztopini dodamo 0,1 ml izotonične raztopine natrijevega klorida brez alergena.

Obe epruveti inkubiramo 10 minut pri 37 ° C, nato pa 10 minut centrifugiramo pri 1500 vrt / min. Potem se supernatant vlije in masa levkocitov, ki ostane na dnu epruvete, se rahlo stresajo in se razcepi v preostalo tekočino, ki teče iz sten. Z uporabo Pasteurjeve pipete se vsebina vsake epruvete prenese na ločena steklena stekelca (v obliki kapljice na robu), tanke levkocitne brise pa pripravijo s poliranim robom drugega stekla.

Razlite madeže z eozin-metilensko modro po May - Grunwald za 1-2 min po sušenju na zraku. Po pranju zdravila v metilnem alkoholu se razmazih mikroskopsko pregleda s potopitvijo (povečava 10 x 80). Izračunajte 50 bazofilcev na robovih razmaza in število poškodovanih srednjih celic. Stopnja poškodovanih celic v poskusnih in kontrolnih pripravkih je določena s formulo:

Reakcija velja za pozitivno, če je hitrost 1,4 in več.

L.A. Duyeva et al. (1986) izbrali delovne koncentracije in odmerke kemičnih alergenov in antibiotikov za reakcijo neposredne specifične poškodbe bazofilcev v krvi (tabela 4).

Tabela 4. Delovne koncentracije in odmerki reagentov za RSPB

Preskus uničevanja mastocitov

Za intraperitonealno injiciranje 8–10 ml (2–5 ml miške) izotonične raztopine natrijevega klorida, segretega na 37 ° C, pripravljenega na 0,15 mol fosfatnega pufra s pH 7,2, se intraperitonealno injicira intraperitonealna injekcija 8–10 ml (2–5 ml miške). Suspenzijo mastocitov izperemo z izotonično raztopino natrijevega klorida in nato centrifugiramo pri 500 rpm.

Suspenzijo mastocitov (0,02 ml) in serum bolnika (0,02 ml) inkubiramo 15 minut pri 37 ° C, nato dodamo 0,02 ml alergena v predhodno izbrani koncentraciji in ponovno inkubiramo 15 minut pri 37 ° C. Hkrati se pripravijo tri kontrole: mastociti brez seruma in brez alergena; mastociti s serumom brez alergena; mastociti z alergenom brez seruma.

Po barvanju vzorcev z 0,025-odstotno raztopino toluidinove modre ali 0,3-odstotne raztopine nevtralnega črnila napolnite z suspenzijo mastocitov iz komore Goryaev in preštejte pobarvane celice s primerjavo števila granuliranih celic v kontrolni in eksperimentalni. Opažena degranulacija mastocitov v testnem vzorcu se šteje za šibko pozitivno, če je 10–20% degranulacije, pozitivno - z 21–40% in izjemno pozitivno - z degranulacijo več kot 40% celic v primerjavi s kontrolo.

Koncentracija alergenov, ki ne povzročajo spontane degranulacije, za antibiotike - 100-1000 U / ml, kalijev bikromat in jodid, natrijev kromat, nikljev sulfat - 0,01-0,1% raztopina, formaldehid - 0,2-0,4%. Alergeni v gospodinjstvu se uporabljajo v odmerku od 10 do 100 PNU.

Reakcija pasivne hemaglutinacije (RPHA) omogoča odkrivanje protiteles na vodotopne in v vodi netopne alergene.

Reakcija temelji na pojavu aglutinacije eritrocitov, ki so bili in vitro senzibilizirani na kemične alergene, z dodatkom bolnikovega seruma, ki vsebuje protitelesa proti poglavjem.

Reakcija inhibicije migracije krvnih levkocitov (RTML) temelji na sposobnosti senzibiliziranih T-limfocitov (npr. Za haptene), da izločajo limfokin, dejavnik, ki zavira migracijo levkocitov. S pomočjo RTML se razkrije reakcija celičnega tipa (ki ni odvisen od protiteles) na različne antigene.

http://medbe.ru/materials/allergicheskie-bolezni/laboratornye-metody-spetsificheskoy-allergodiagnostiki/?PAGEN_2=2

Metodologija, cilji in načela diagnostike alergij in vitro

Yu.A. Mitin, dr. Med., Vojaška medicinska akademija, Sankt Peterburg.

Revija: "Imenik vodje CLL"

Možnosti vseh laboratorijskih metod, vključno z metodami in vitro alergijske diagnoze, so omejene z dejstvom, da laboratorijski zdravniki v študiji ne obravnavajo celotnega človeškega telesa, temveč le s svojimi tkivi (limfom, krvjo, urinom itd.). Poleg tega laboratorijske metode, ki se uporabljajo pri alergijski diagnostiki, nimajo možnosti za odkrivanje morfoloških sprememb v tkivih, kot so nekatere druge raziskovalne metode (rentgen, ultrazvok itd.), Kot tudi za določanje številnih funkcionalnih značilnosti tkiv in organov ( elektrofiziološka aktivnost srca kot pri študiju EKG, reoencefalografske značilnosti kot pri študiji REG itd.).

S sklepanjem na podlagi podatkov iz alergološkega laboratorijskega pregleda zdravnik v laboratoriju v bistvu oblikuje laboratorijski del splošne diagnoze alergijske bolezni. Ta laboratorijski fragment diagnoze uporablja zdravnik pri ugotavljanju popolne diagnoze alergijske bolezni, vključno z njeno resnostjo in naravo tečaja, na podlagi podatkov iz anamneze, kliničnih, posebnih, laboratorijskih in dodatnih raziskovalnih metod.

SPLOŠNI OPIS PRINCIPOV IN NALOG ZA LABORATORIJSKE DIAGNOSTIČNE ALERGIJSKE BOLEZNI

Ugotavljanje etiologije alergijske bolezni, kot je znano, je sestavljeno iz prepoznavanja specifičnih vzrokov - alergenov, ki povzročajo razvoj simptomov bolezni. Z oblikovanjem sodobne definicije alergena in senzibilizacije lahko rečemo, da je alergen kompleksna snov z epitopom, kritična molekulska masa, imunski odziv na katerega se uresničuje s preobčutljivostjo ali alergijsko reakcijo, in preobčutljivost je specifična spremenjena reaktivnost imunskega sistema zaradi prisotnosti alergensko specifičnih protiteles in alergena. specifični limfociti, tudi pojav in rast zastopanja receptorjev različne afinitete za vezavo alergensko specifičnih anti telesa v organih in tkivih (Mitin Yu.A., 2005).

Laboratorijska diagnostika alergijskih bolezni naj bi kliniki pomagala pri ugotavljanju etiologije bolezni, njenih patogenetskih značilnosti, vključno z naravo in obsegom motenj imunskega in drugih telesnih sistemov. Glavni cilji laboratorijske diagnostike alergijskih bolezni so:

• ugotavljanje preobčutljivosti na alergene (specifična alergijska diagnoza);

• določitev vrste (-ev) alergijske reakcije (specifična alergijska diagnoza);

• identifikacija narave in obsega imunskih motenj (imunodiagnostika);

• karakterizacija patogenetskih sprememb, značilnih za to alergijsko bolezen (klinična laboratorijska diagnostika).

Tako je določitev senzibilizacije za alergene in vrste (vrste) alergijske reakcije cilj specifične alergijske diagnoze.

Etiološka diagnoza vključuje ugotavljanje ne samo senzibilizacije za posamezne alergene, vrste (-ov) alergijske reakcije, temveč predvsem ugotavljanje njihove vloge pri razvoju določene alergijske bolezni. Prikazana je uporaba posebnih metod laboratorijske diagnostike alergije: t

• potrditev prisotnosti preobčutljivosti;

• identificirati skrito (subklinično) senzibilizacijo;

• če obstajajo kontraindikacije za kožne preiskave (poslabšanje osnovne bolezni; razvoj akutnih nalezljivih, živčnih in duševnih bolezni; v primeru dekompenziranih bolezni srca, jeter, ledvic in krvnega sistema; kmalu po akutni alergijski reakciji; med zdravljenjem s hormoni); ;

• v vseh primerih, ko je prikazana reakcija Prausnitsa - Kyustner, vendar ni prejemnika ali obstaja nevarnost, da se prejemnik okuži z nalezljivo boleznijo, ki je prisotna v darovalcu;

• v primerih potrebe po diferencialni diagnozi pozitivnih / lažno pozitivnih ali negativnih / lažno negativnih rezultatov, pridobljenih s testiranjem na koži. Načela laboratorijske diagnostike alergijskih bolezni:

Vodilna vloga zdravnika v tandemu je klinični zdravnik - laboratorijski asistent.

Diagnoza alergijske bolezni vključuje dve stopnji: klinično in laboratorijsko. Pred določitvijo specifične laboratorijske metode specifične alergijske diagnoze je treba ugotoviti značilnosti imunološkega mehanizma za izvajanje alergijske reakcije pri bolniku. V ta namen alergolog analizira zgodovino, klinične manifestacije bolezni v preteklosti in sedanjosti, da bi ugotovil nenadoma domnevne alergene in vrsto imunoloških reakcij. Pri ugotavljanju kliničnih simptomov ali sindromov jih pripisuje določeni vrsti alergijskih reakcij, katerih udeleženci (npr. IgE, specifični za alergijske reakcije tipa 1), morajo biti določeni z laboratorijskimi metodami. Obstoječe laboratorijske metode razkrivajo le stanje preobčutljivosti, kar kaže na spremenjen odziv bolnikovega imunskega sistema na določen alergen. Ker so le ti imunske motnje in ne reakcija celotnega organizma, rezultati laboratorijske diagnostike ne morejo biti edini dokaz, da je ta alergen etiološki povzročitelj alergijske bolezni.

Zato je klinični zdravnik - laboratorijski tehnik, ki določa obseg in nujnost določenih raziskovalnih metod - v kliniki zdravnik - z drugimi besedami, definira diagnostično strategijo.

Prednost klinične faze (obseg in metode laboratorijskih študij se določijo v fazi kliničnega pregleda).

Pri načrtovanju laboratorijske diagnostike in potrebi po nekaterih specifičnih raziskovalnih metodah je treba upoštevati razlike v imunoloških mehanizmih in udeležencih pri različnih vrstah alergijskih reakcij, saj večina laboratorijskih metod daje informacije le o specifičnih udeležencih imunskega odziva (npr. Za odkrivanje specifičnih protiteles razredov IgG ali IgM v tipu 2). alergijske reakcije, kot tudi preobčutljivi limfociti s alergijskimi reakcijami tipa 4). eneticheskih mehanizmi alergijske bolezni lahko vplivajo na izbiro določenih raziskovalnih metod, zahteva uporabo ustreznih metod patogenezo, tj utemeljuje načelo 3.

Patogenetska ustreznost (skladnost uporabljenih laboratorijskih raziskovalnih metod s patogenezo preučenih reakcij).

Imunološke teste alergijske diagnoze lahko razdelimo v dve veliki skupini:

1) nespecifične (namenjene ugotavljanju skupnih sprememb v imunskem sistemu med alergijami);

2) specifično (identifikacija protiteles in celic, vključenih v imunološko fazo alergijske reakcije).

Specifična alergijska diagnostika invitro vključuje 2 glavni vrsti testov: odkrivanje protiteles (neposredno ali posredno) ali alergensko občutljivih limfocitov. Obstoječe imunološke metode specifične alergijske diagnostike razkrivajo stanje preobčutljivosti, to pomeni, da kažejo na spremenjeno reakcijo imunskega sistema le na določen alergen, vendar še ne morejo služiti kot edini dokaz, da alergen povzroča alergijsko reakcijo, za katero je značilna prisotnost reakcije več tkiv ali alergijske bolezni. ki zahteva prisotnost reakcije celotnega organizma.

Za popolno opredelitev sprememb samo enega (imunskega) sistema so potrebne dodatne študije, poleg identifikacije preobčutljivosti in alergena, ki ga povzroča. Zato je za popolnejšo karakterizacijo specifičnih in nespecifičnih sprememb v imunskem sistemu potrebno uvesti 4 načela.

Kombinacija specifičnih in nespecifičnih metod imunodiagnostike.

Pri diferencialni diagnozi alergijskih in nealergijskih (psevdo-alergijskih) bolezni je treba pojasniti vključenost imunoloških mehanizmov (imunopatogeneza) pri njihovem izvajanju. Znano je, da se alergijski in psevdoalergijski procesi razlikujejo predvsem v prisotnosti (alergiji) ali odsotnosti (v psevdo-alergiji) imunološke (prve) faze alergijske reakcije. Ker sta drugi dve fazi, patokemični in patofiziološki, skupni tem procesom, lahko formuliramo še eno pomembno načelo za diferencialno diagnozo alergije in psevdoalergije.

Vzpostavitev neimunoloških (psevdo-alergijskih) mehanizmov bolezni z izključitvijo imunoloških mehanizmov.

V ta namen se uporabljajo metode za preučevanje imunopatogeneze alergij, ki določajo možne udeležence imunološke faze, na primer določanje specifičnih protiteles razreda IgE pri reakcijah tipa 1 ali senzibiliziranih limfocitov pri reakcijah tipa 4. t Samo negativni odziv takih študij kaže, da je reakcija ali bolezen v naravi psevdoalergijska.

Standardne tehnike, razpoložljivost laboratorijskih testov za nadzor kakovosti.

Merila, ki označujejo različne vrste laboratorijske diagnostike, so lahko povezana z vrednotenjem različnih komponent njihove učinkovitosti: analitične, ekonomske in diagnostične. Analitska lastnost se razume kot najmanjša količina snovi, določena z metodo. Ekonomska značilnost je povezana z oceno stroškov ene raziskave. Diagnostični pristop je povezan z vrednotenjem laboratorijskih testov, ki temelji na porazdelitvi rezultatov raziskav na resnične in lažne. Kot metoda, ki se uporablja za vrednotenje rezultatov, se uporablja koncept brezmadežnega »zlatega standarda«, tj. nekatera metoda je priznana kot merilo, s katerim se primerjajo druge metode.

Vsi rezultati raziskav: pri bolnikih je lahko resnično pozitiven (PI) in lažno negativen (LO), pri zdravih bolnikih - resnično negativen (IO) in lažno pozitiven (LP), za laboratorijske teste s tem pristopom pa izstopajo naslednji indikatorji:

Diagnostična občutljivost (Se, občutljivost). Predstavlja odstotek pogostosti resničnih pozitivnih rezultatov testov pri bolnikih s to boleznijo na vsoto resničnih pozitivnih in lažno negativnih rezultatov ali z drugimi besedami, kot delež bolnikov, ki kažejo pozitiven rezultat, ali kot pogostost pozitivnega rezultata testa pri bolnikih:

Se = (PS / S) x100%, kjer je PS resnično pozitiven, S število bolnikov.

Diagnostična specifičnost (Sp, specifičnost) je odstotek resnično negativnih rezultatov pri ljudeh, ki ne trpijo zaradi bolezni (zdravega) na vsoto resnično negativnih rezultatov (to je verjetnost negativnega testa v odsotnosti bolezni), z drugimi besedami, pogostnost negativnega rezultata testa, pridobljenega iz zdravih osebe:

Sp = (NH / H) x100%, kjer je NH resnično negativen rezultat testa in H število zdravih posameznikov.

Diagnostična učinkovitost (DE) je odstotek resničnih, to je, kar ustreza stanju testiranih rezultatov preskusov bolnikov, na skupno število dobljenih rezultatov ali na delež dejanskih rezultatov v skupnem številu študij:

DE = (PS + NH) n, kjer je PS število resnično pozitivnih primerov, NH število resnično negativnih primerov, a je število študij.

Na splošno so krivulje specifičnosti in občutljivosti pri določanju kateregakoli kvantitativnega parametra v določenem razmerju (več - manj). Pomembno vlogo ima določitev točke delitve - stopnja registracije pozitivnega rezultata. Hkrati, da bi vzpostavili ločilno točko ob upoštevanju posledic napačnih odločitev, je krivulja ROC (relativna operativna značilnost), tj. krivulja medsebojne odvisnosti verjetnosti lažno pozitivnih in lažno negativnih rezultatov. Pri uporabi te krivulje velja naslednja situacija: premik točke ločevanja pri določanju nizkih koncentracij poveča občutljivost (odkrije se več bolnikov), hkrati pa se poveča število lažno pozitivnih rezultatov. Zato je njegova uporaba zgrajena na izbiri točke ločevanja, ki temelji na oceni »dobrega« in »škode« razmerja med resničnimi in napačnimi odločitvami (bolj pozitivno - bolj lažno pozitivno, bolj negativno - bolj lažno negativno). Na žalost alergiki doslej še niso našli idealne, splošno priznane metode, ki bi omogočila 100% primerov, da bi razkrili resnično senzibilizacijo - brez lažno pozitivnih ali lažno negativnih rezultatov, kar je popolnoma povezano z rezultati klinične diagnostike.

Rezultat celotnega diagnostičnega procesa je vrednotenje laboratorijskih podatkov iz klinične perspektive - klinična in imunološka interpretacija laboratorijskih rezultatov.

Za oceno sprememb v imunskem sistemu so potrebne posebne (imunološke) laboratorijske metode. Prepoznavanje alergenov in kasnejše alergijske reakcije sprožijo aktivacijo imunskega sistema. Za določitev obsega takšne aktivacije se izvajajo laboratorijske študije za oceno sprememb v morfologiji in funkcijah različnih delov imunskega sistema. V ta namen se uporabljajo testi za določanje subpopulacij limfocitov T in B, ravni imunoglobulinov, komplementa, cirkulirajočih imunskih kompleksov, mediatorjev alergijskega vnetja in citokinov, ki so bolj vključeni v imunski odziv na alergene: IL-4 (aktivacija IgE produktov), ​​IL -10, IL-5, gama-interferon in drugi: 6-18 ur po reakciji z alergenom na senzibiliziranih limfocitih se poveča ekspresija IL-2 receptorjev, raven katere lahko ocenimo z uporabo monoklonskih protiteles proti antigenu CD25. Z istim namenom je mogoče določiti prisotnost na limfocitih drugih aktivacijskih molekul - CD69, CD71. Znano je, da stimulacija limfocitov z alergeni povečuje izločanje IL-5, IL-4, gama-interferona, ne pa tudi IL-2 in faktorja tumorske nekroze alfa. Alergijske bolezni lahko spremljajo spremembe v vzorcu periferne krvi in ​​beljakovinskih frakcij. Pogosto pride do limfocitoze, povečanja vsebnosti beljakovinskih frakcij, zmanjšanja ravni trombocitov in albumina. Poleg tega lahko pride do povečanja vsebnosti ESR, levkocitov in eozinofilcev.

Značilne spremembe v imunskem sistemu, ki se pojavijo med alergijskimi reakcijami in boleznimi:

• zmanjšanje absolutne in relativne ravni T-celic (fenotip CD3 + CD8 +);

• sprememba števila T-pomožnih celic (fenotip CD3 + CD4 +);

• povišane ravni aktiviranih T-limfocitov (HLA-DR +, CD25 +);

• sprememba ravni citokinov - povečanje koncentracije IL-4 in IL-5, zmanjšanje vsebnosti gama-interferona;

• povišane vrednosti IgG, IgM, celotnega IgE;

• zmanjšanje fagocitne aktivnosti nevtrofilnih levkocitov;

• povišane ravni eozinofilcev kationskih beljakovin;

• povečanje ravni CEC.

Najpogosteje uporabljena v klinični praksi je preučevanje ravni celotnega in alergensko specifičnega imunoglobulina E. Razmislite o interpretaciji teh študij.

Značilnosti interpretacije celotnega IgE.

1. Povečanje ravni skupnega IgE lahko povzroči ne le atopija, temveč tudi številne druge bolezni, vključno z helmintske invazije, imunske pomanjkljivosti, bronhopulmonalna aspergiloza itd.

2. Normalna raven skupnega IgE v serumu ne zanika prisotnosti preobčutljivosti. Približno tretjina bolnikov z atopičnimi boleznimi je lahko skupna koncentracija IgE v normalnih mejah (30-100 kE / l).

3. V primeru preobčutljivosti na enega (več) alergenov je lahko vsebnost celotnega IgE znotraj normalnih meja in specifični IgE se poveča.

4. Koncentracija celotnega IgE v serumu je lahko v normalnih mejah v neatopičnih stanjih neimuno narave kronične rekurentne urtikarije in angioedema.

5. Zgornja meja norme skupnega IgE (100 kE / l) pri predstavnikih con, ki so endemične za helmintozo, je lahko višja kot običajno.

6. Zaznavanje alergensko specifičnega IgE (katerega koli alergena ali antigena) razkriva le senzibilizacijo in še ne dokazuje, da je ta alergen vzrok za alergijsko bolezen.

Značilnosti interpretacije določenih IgE.

1. Negativni rezultat študij na specifičnih IgE je lahko posledica strategije presejanja (ni bilo testa za ta alergen). Odsotnost specifičnega IgE v serumu periferne krvi ne izključuje možnosti sodelovanja v patogenezi IgE-odvisnega mehanizma alergijske reakcije, saj je možna lokalna IgE sinteza ali vezava sintetiziranih IgE tkiv, ki se lahko pojavi brez spreminjanja koncentracije specifičnega IgE v periferni krvi.

2. Protitelesa drugih razredov, zlasti IgG (IgG4), specifična za alergen, so v nekaterih primerih lahko vzrok za lažno negativne rezultate.

3. Visoka stopnja alergensko specifičnega imunoglobulina E označuje prisotnost visoke stopnje senzibilizacije le v povezavi s specifičnim alergenom, ki ga proučujemo.

4. Pri visokih koncentracijah celotnega IgE se lahko pojavijo lažno pozitivni rezultati študij na specifičnih IgE Pod takimi pogoji se poveča verjetnost nespecifičnega vezave IgE na alergen.

5. Identični kvantitativni rezultati določanja specifičnih IgE za različne alergene ne pomenijo enake klinične vrednosti.

6. Končni zaključek in razlago laboratorijskih podatkov mora opraviti alergolog na podlagi primerjave laboratorijskih rezultatov s klinično sliko in zgodovino alergije.

Skratka, ponovno se lahko spomnimo glavnih prednosti imunoloških metod, ki se uporabljajo pri alergologiji:

• varnost bolnikov;

• možnost izvajanja raziskav v katerem koli, tudi zgodnjem otroštvu, v obdobju poslabšanja, z visoko stopnjo preobčutljivosti;

• identifikacija reakcij na veliko število alergenov za 1 študijo;

• nobenega učinka spremenjene reaktivnosti kože;

http://www.alkorbio.ru/allergodiagnostika0/metodologiyazadachiiprintsipiallergodiagnostikiinvitro.html

Laboratorijske metode alergijske diagnoze

Te metode se lahko široko uporabljajo pri alergijskih boleznih v akutni fazi, v času masivnega stika z alergenom, z visoko občutljivostjo bolnikov na alergen, če pri otrocih obstajajo kontraindikacije pri ugotavljanju poklicnih alergijskih bolezni, saj izključujejo možnost nespecifičnih, lažno alergijskih reakcij.

Metode, ki odkrivajo alergijsko reakcijo takojšnje, B-odvisne vrste, vključujejo:

a) določanje celotnega IgE (vendar je lahko njegova visoka raven v produktivni fazi imunskega odziva), t

b) določitev alergensko specifičnih IgE in IgG4.

Ravni IgE in IgG4 se določijo z ELISA (glej lab.class 6).

Odkrivanje IgE in IgG4 se izvaja proti več kot 400 alergenom, vključno z alergeni v hrani; alergeni bakterij in gliv, živalski prhljaj in perutnina perja; alergeni travnega in drevesnega cvetnega prahu; alergeni klopov, hišni in knjižnični prah, insekti; zdravstveni in poklicni alergeni.

Trenutno so bili razviti testni sistemi, ki omogočajo večkratno diagnostiko specifičnih IgE. Multiple alergosorbentni test s kemiluminescenčno analizo (MAST-CLA ali MAST alergotest) omogoča hkratno določitev do 36 alergenov z majhno količino seruma (0,75 ml). Za test se uporablja MAAST-alergopanel, ki je votla prozorna plastična torbica z najtanjšimi celuloznimi nitmi, vzporedno z notranjostjo, na katere se sorbirajo alergeni (sl. 9.1).

Opomba: 1 - MAST panel, 2 - pokrov,

3 - celulozna preja z adsorbiranim alergenom, 4 - telo

Sl. 9.1 Načelo kemiluminescentne analize med MAST

Bistvo MAST alergijskega testa je izvedba reakcije vezave alergena s specifičnim IgE, čemur sledi označevanje nastalega kompleksa s fotoreagentom in določanje njegove luminiscence, katere intenzivnost je sorazmerna koncentraciji specifičnega IgE v serumu bolnika. MAST alergopanel napolnimo (s konvencionalno brizgo) s serumom bolnika, inkubiramo pri sobni temperaturi 16-24 ur. Nato po pranju plošče z običajno destilirano vodo s pufrom napolnimo s konjugatom (anti-IgG, označen s peroksidazo) in inkubiramo 4 ure. Nato se po pranju plošča napolni s fotoreagentom in analizira v luminometrih. Naprava registrira razred vrednosti od 0 do 4 v skladu z nivojem luminiscence iz vsake posamezne žarnice plošče. Ti razredi ustrezajo razredom vzorcev kože. Ravni IgE, ki ustrezajo razredom MAST alergije in vrednosti luminometra, so predstavljene v tabeli 9.2.

Razlaga rezultatov pri izvajanju alergijskega testa

Poleg odkrivanja specifičnih IgE se uporabljajo tudi drugi laboratorijski testi za diagnosticiranje reakcij, odvisnih od protiteles, in odloženih reakcij. Te metode nam omogočajo preučevanje patogeneze alergijskih reakcij. Te vključujejo:

- reakcija degranulacije mastocitov ali bazofilcev,

- reakcija inhibicije migracije krvnih levkocitov (RTML), t

- reakcija poškodbe nevtrofilcev (RPN),

- opredelitev prostega vezanega histamina,

- določanje IL 4,5,6, TGFb,

- določanje triptaze in kimotriptaze (triptaza, zlasti β-oblika, se lahko odkrije v krvi 4 ure po anafilaktični reakciji in služi kot klinični marker anafilaksije),

- določanje levkotrienov (LTC4, LTD4, LTE4) z uporabo testa sproščanja celičnega mediatorja,

- določitev števila aktiviranih bazofilcev, ki izražajo antigen CD63 (gp53) na površini kot odziv na stimulacijo alergena (citometrični alergen-stimulativni celični test, CASC test).

Opredelitev teh indikatorjev vam omogoča razumevanje posameznih značilnosti poteka alergijskih reakcij, kar je pomembno za zdravljenje bolnika.

Celični test za sproščanje mediatorjev temelji na določanju sulfidol-leukotrienov (LTC4, LTD4, LTE4), ki jih izločajo bazofili pod vplivom alergena in vitro (sl. 9.2). Imenuje se tudi provokativni test in vitro. Zaradi de novo sinteze sulfidol-levkotrienov ima ta test v primerjavi s klasičnim testom sproščanja histamina večjo specifičnost. Protokol študije vključuje tri korake:

1) izoliranje populacije limfocitov iz stabilizirane EDTA v krvi,

2) stimulacija suspenzije limfocitov s specifičnimi alergeni,

3) encimsko vezan imunski test levkotrienov, ki ga sintetizirajo bazofili med stimulacijo.

Slika 9.2 Načelo testov za stimulacijo bazofilnega antigena

Test velja za pozitivno za hrano, inhalacijske alergene, lateks, strup insektov pri določanju ravni levkotrienov 200 pg / ml; za alergene zdravil, kakor tudi za živila in kemične dodatke 40 pg / ml.

Citometrična različica bazofilnega stimulacijskega testa - citometrični antigen, ki stimulira celični test (test CASK) omogoča določanje števila aktiviranih bazofilcev, ki izražajo antigen CD63 na površini. Stopnje izolacije limfocitov in stimulacija njihovih antigenov za obe varianti (encimski imunski test in citometrični) sta identični. Toda namesto sulfidol levkotrienov, tretja faza določa število aktiviranih bazofilcev, ki izražajo antigen CD63 (gp53) na površini kot odgovor na stimulacijo z alergenom. Test je zelo občutljiv in specifičen za anafilaktične reakcije, zlasti za preobčutljivost za zdravila.

V testu CASK se izolirani levkociti inkubirajo s stimulacijskim pufrom in alergenom. Nato dodamo anti-IgE monoklonski Ab z fluorescentno oznako, da identificiramo bazofile, nato monoklonska protitelesa dodamo CD63 (glej sliko 9.2) in ekspresijo CD63 AH določimo na površini bazofilcev s pretočno citometrijo. Na primer, za alergene za hrano in inhaliranje se šteje, da je test pozitiven, če je CD63 izražen na površini 15% bazofilcev; za strupe insektov - 10%; beta-laktamski antibiotiki in analgetiki - 5% bazofilcev in stimulacijski indeks 2. Izračunajte indeks stimulacije, ki je opredeljen kot razmerje CD63 + bazofilcev v vzorcu z alergenom (%) na število teh celic v vzorcu brez alergena (%).

Caska test je specifična za določitev IgE posredovane alergijo na inhalacijske alergene (pri kožnih testov ni mogoče izvesti, ker je tveganje za bronhospazem in statusa astmatičnega), cvetni prah, drog, beta-laktamske antibiotike, mišični relaksanti, analgetikov, alergija na lateks, pike za Hymenoptera žuželke, psevdo-alergijske reakcije na protivnetna nesteroidna zdravila, ki jih povzročajo komponente komplementa, plazma, določanje avtoprotiteles na IgE. Rezultati testa CASK se dobro ujemajo z rezultati kožnih testov.

Oba testa sta zelo specifična za diagnozo alergij na hrano in intolerance, alergije pri vdihavanju, ko kožnih testov ni mogoče uporabiti (za alergije na lateks, ugrize insektov, alergije pri otrocih, alergije na zdravilo in intolerance, različne psevdoalergijske reakcije).

Uporaba CASK-testa in celičnega testa sproščanja mediatorjev pri diagnosticiranju alergij na hrano in intolerance, psevdo-alergijske reakcije se lahko uporabi za pripravo hipoalergenske in izločilne diete.

Diagnoza psevdoalergijskih reakcij. Psevdoalergijske reakcije v kliničnih simptomih so lahko podobne resničnim IgE-posredovanim reakcijam, vendar se razlikujejo po mehanizmih razvoja. Njihov razvoj ni povezan z nastankom Ab ali s sodelovanjem senzibiliziranih limfocitov, v patogenezi teh reakcij pa sta samo dve stopnji - patokemična in patofiziološka. Pri teh bolnikih je serumska koncentracija IgE običajno v normalnih mejah.

Vendar se med psevdo-alergijskimi reakcijami pojavi nespecifično sproščanje mediatorjev: histamin, levkotrieni, prostaglandini. Zato se za diagnosticiranje psevdoalergijskih reakcij uporablja test CASA za odkrivanje aktiviranih bazofilcev in celičnih testov sproščanja mediatorjev za določitev koncentracije LTC4, LTD4 in LTE.

http://studopedia.org/12-101069.html